国外研究报告学术-多能干细胞培养基的方法和说明

国外研究报告中，在多能干细胞培养基的方法做出说明，以当前用于培养多能干细胞的无血清培养基配方需要每天补充培养基，并且周末至少需要更换一次培养基。随着越来越多的核心实验室和财团致力于使用人诱导性多能干细胞生成疾病模型，媒体，试剂和人力资源的成本变得过高。人类胚胎干细胞/ 诱导性多能干细胞培养基是基于小分子的培养基，可在周末无人培养多能干细胞，并允许隔日更换培养基，而不会损害多能干细胞的形态或长期功能。维持这种适度喂养方案的多能细胞表现出强大的细胞健康性，自发分化程度低，并表达了高水平的多能性标志物。

其中在培养基中培养干细胞的方法如下：

一、干细胞培养用涂层板的制备

用培养基扩增人类胚胎干细胞和诱导性多能干细胞需要用ECM凝胶基质（CC131）或无异种底物如玻连蛋白（CC130）或ECMatrix?-511层粘连蛋白底物包被的培养皿。以下是用ECM凝胶基质包被6孔板和培养瓶的一般指导原则：

1、在冰上解冻ECM凝胶基质（CC131）。保持在冰上，并使用预冷的培养基和移液器，以避免ECM试剂过早凝胶化。重要说明：为防止意外胶凝，请勿在高于15°C的温度下解冻ECM Gel Matrix。

2、用冷的DMEM / F12（D6421）稀释ECM Gel Matrix 1:20。例如，向每0.5 mL ECM凝胶基质中加入9.5 mL冷DMEM / F12培养基，总体积为10 mL。根据所需的体积缩放。

3、用推荐的体积盖住培养皿表面（例如：向6孔板的每个孔中添加1.5 mL）。旋转培养板，使ECM凝胶基质均匀地分布在培养板表面。在室温下孵育至少1小时或2–8°C过夜。如果不立即使用，请将涂层的培养皿保存在2-8°C，直到可以使用为止。注意：如果不立即使用，有涂层的培养皿应该用封口膜密封，以防止蒸发，并且可以在2 – 8°C下保存长达一周。

4、在接种细胞之前，将板恢复到室温，除去包被溶液，并添加适当体积的 胚胎干细胞/ 诱导性多能干培养基（SCM130，SCM132）。重要提示：请勿让烧瓶干燥。

二、用于干细胞培养的Dispase II的制备

可以使用Dispase II蛋白酶对保存在培养基中的多能人ES和iPS细胞进行酶传代。Dispase II溶液（SCM133）是一种即用型1 mg / mL溶液，经过验证可与人类胚胎干细胞和诱导性多能干细胞培养基一起用于人胚胎和诱导多能干细胞的培养和传代。